Fluoreszenz-Bildgebung von oberflächlichen …

Fluoreszenz-Bildgebung von oberflächlichen …

Fluoreszenz-Bildgebung von oberflächlichen ...

Fluoreszenz-Imaging von oberflächlichen Kopf und Hals Plattenepithelkarzinome Eine γ-Glutamyl-aktivierte Targeting-Mittel verwendet: eine Pilotstudie

abstrakt

Hintergrund

Erkennen von oberflächlichen Kopf- und Hals Plattenepithelkarzinom (HNSCC) Durch Endoskopie ist wegen der begrenzten morphologischen Merkmale herausfordernd und Jod kann nicht Kopf- und Halsverletzungen aufgrund der Starken Schleimhautreizungen ein angewendet Werden. γ-Glutamyl (GGT), Enzym Eine Zelloberfläche, Wird in mehreren Krebsarten überexprimiert, und es wurde berichtet, Dass γ-Glutamyl hydroxymethyl Rhodamin grün (gGlu-HMRG), ein fluoreszierendes Targeting-Mittel, sterben enzymatisch aktiviert Werden Kann, und Werd fluoreszierendes nach Spaltung Einer GGT-spezifischen Sequenz Kann, Innerhalb von wenigen Minuten nach DM auftragen auf Tiermodellen aktiviert Werden. untersuchten, ob frühzeitig HNSCC Durch Die anwendung gGlu-HMRG zu Klinischen Proben Nachgewiesen Werden Wir.

Methoden

gGlu-HMRG Wurde zu vier HNSCC Zelllinien Angewandt, und sterben Fluoreszenz Durch Fluoreszenzmikroskopie und Durchflusszytometrie Beobachtet Würde. Immunhistologische Untersuchung Wurde in drei Jüngsten Fälle von endoskopischen Submukosadissektion (ESD) Zu untersuchen GGT Expression durchgeführt. Fluoreszenz-Bildgebung mit gGlu-HMRG in acht Klinischen Proben reseziert Durch ESD oder Eine Bedienung durchgeführt Wurde, Sterben und Fluoreszenzintensität des Tumors und Normalen Schleimhaut Regionen von Interesse (ROI) Wurde prospektiv gemessen.

ergebnisse

Alle vier gGlu-HMRG-Zelllinien Angewandt grüne Fluoreszenz emittiert. Immunhistologische Untersuchung zeigte, dass GGT Wurde in HNSCC der Letzten drei ESD Gefallene Aber Kaum in der Normalen Schleimhaut stark exprimiert. Fluoreszenz-Bildgebungs zeigte, dass IOD-Miktion Läsionen Innerhalb von wenigen Minuten nach Applikation von gGlu-HMRG in allen acht resezierten Tumoren Wurde fluoreszierend. Tumor ROI Fluoreszenzintensität Krieg merkbar Höher als in der Normalen Schleimhaut fünf Minuten nach gGlu-HMRG anwendung.

Schlussfolgerungen

Fluoreszenzbildgebung mit gGlu-HMRG Würde zur Früherkennung von HNSCC Nützlich sein.

Schlüsselwörter

Fluorescent Imaging-γ-Glutamyl Kopf und Hals Plattenepithelkarzinome

Hintergrund

Kopf und Hals Plattenepithelkarzinom (HNSCC) ist sterben sechsthäufigste Krebsart in der Welt, mit über 630.000 neue Fälle diagnostiziert jährlich [1]. Die Prognose der HNSCC ist schlecht, Weil es in der Regel in der Fortgeschrittenen-Stadion [2 3] Erkannt Werd. Doch Patienten mit HNSCC im Frühstadium, Wie im Stadium I und II, Motivation und andere Mentalität Eine bessere Prognose mit Einems 70-90% 5-Jahres-Überlebensrate im Vergleich zu Patienten mit fortgeschrittenem HNSCC [4]. DAHER ist Früherkennung von HNSCC sterben zwingend Notwendig, vor Allem für Patienten mit Hohem Risiko, Wie Zigarettenrauchern und Alkoholikern; jedoch ist Früherkennung von oberflächlichen HNSCC sehr Schwierig sterben, Weil es nur Wenige morphologischen Kennzeichen der Krankheit zu unterscheiden [5]. Obwohl Jod Chromoendoskopie hat allgemein für den Nachweis von Frühen Plattenepithelkarzinom des Ösophagus (SCC) [6 7] Angenommen Worden ist, Kann es nicht zu Kopf-Hals-Läsionen in der konventionellen Endoskopie angewendet Werden, da Jod verursacht schwere Schleimhautreizungen, STERBEN Aspiration in sterben zur Folge HABEN kann Atemwege [8 9].

Narrow Band Imaging (NBI) und Autofluoreszenz-Bildgebung (AFI) verwendet gerechnet gerechnet wurden früh HNSCC zu Erkennen Obwohl, HABEN diese Modalitäten nicht allgemein Akzeptiert Worden [10 11]. DAHER ist ein effizientes und zuverlässiges Elle Elle Verfahren oberflächliche HNSCC nachzuweisen Erforderlich.

γ-Glutamyl (GGT) ist ein Enzym-Zelloberfläche in zellulären Glutathion-Metabolismus beteiligt und Wurde beschrieben in Verschiedenen Menschlichen Krebsarten, sterben Wie von der Lunge, Eierstock, Leber und Gallengang [12 bis 14] überexprimiert Werden. GGT Wurde Eine Rolle in der Tumorprogression, Invasion und Medikamentenresistenz [12 15] zu spielen gemeldet. Es wurde berichtet, Dass γ-Glutamyl hydroxymethyl Rhodamin grün (gGlu-HMRG), ein fluoreszierendes Targeting-Mittel, sterben enzymatisch aktiviert Werden Können, Auf dem Fluorophor Rhodamin grün basiert, sterben fluoreszierend nach Spaltung Einer GGT-Spezifische Sequenz Werd, Wurde Entwickelt und gGlu -HMRG Gezielt in Sekunden bis Minuten Durch topische anwendung aktiviert Werden [16]. Es Hat sich Auch gezeigt, dass gGlu-HMRG Endoskopische Nachweis von Colitis-assoziiertem Krebs mit Einems bildenden höheren Ziel-zu-Hintergrund-Verhältnis als herkömmliche Weißlicht-Koloskopie in Einems Mausmodell verbessern Kanns [17]. Ob jedoch Fluoreszenz-Bildgebung mit gGlu-HMRG humanen HNSCC Erkennen Kann ist noch nicht geklärt Werden.

Dementsprechend war das Ziel dieser Studie zu bewerten, ob oberflächliche HNSCC Durch anwendung von Frischen Klinischen Proben gGlu-HMRG Nachgewiesen Werden Kann Durch Eine Submukosadissektion Endoskopische (ESD) oder Lokale chirurgische Resektion erhalten Werden.

Methoden

Die Enzymatische aktivierbaren Fluoreszenz Targeting-Mittel

gGlu-HMRG Wurde synthetisiert, Wie zuvor beschrieben [18], und in 10 mM Dimethylsulfoxid (DMSO, Sigma-Aldrich, St. Louis, Missouri) und aufbewahrt bei -80 ° C resuspendiert. Wenn unter verwendung von phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS, Life Technologies, Carlsbad, Kalifornien) verwendet, Wurde gGlu-HMRG bei Raumtemperatur aufgetaut und auf 1 oder 100 mgr; M verdünnt.

Zellkultur

HNSCC Zelllinien-HSC2, HSC3 und HSC4-gerechnet gerechnet wurden von der American Type Culture Collection (ATCC; Manassas, Virginia) erhalten und in Dulbeccos modifiziertem Eagle — Medium (DMEM; Nacalai Tesque, Kyoto, Japan) mit 10% fötalem Rinderserum (FBS , Leben Technologies), 100 U / ml Penicillin und 100 ug / ml Streptomycin (Wako Pure Chemical Industries, Osaka, Japan). SCC25 Zellen aus der Japanischen Sammlung von Forschungs Bioresources (JCRB, Osaka, Japan) und kultiviert in DMEM / F-12 (Nacalai Tesque), MIT supplementiert 10% FBS, 100 U / ml Penicillin und 100 ug / ml Streptomycin enthielt, erhalten gerechnet gerechnet wurden. Die Kultur bei Wurde 37 ° C in befeuchteten Einer Atmosphäre von 95% Luft und 5% CO beibehalten2 .

Die Fluoreszenzmikroskopie

Die Zellen gerechnet gerechnet wurden in 35 mm-Schalen gezüchtet; Als nächstes, sterben, ideal für Zellen bei ETWA 80% Konfluenz erreicht war, gerechnet gerechnet wurden sterben Zellen Mit PBS gewaschen, 1 mgr; M gGlu-HMRG Wurde zugegeben und sterben Zellen gerechnet gerechnet wurden im Dunkeln für 20 min bei 37 ° C inkubiert. Die Fluoreszenzmikroskopie unter verwendung Eines Biorevo BZ-9000-Mikroskop Würde (Keyence, Osaka, Japan) durchgeführt, ausgestattet mit den folgenden Filter: Anregungswellenlänge, 450 490 nm; Emissionswellenlänge, 500 550 nm. Phasenkontrastbilder gerechnet gerechnet wurden ebenfalls Entwickelt.

Durchflusszytometrie

Kultivierte Zellen gerechnet gerechnet wurden MIT 0,25% Trypsin / Ethylendiamintetraessigsäure (Life Technologies) Behandelt, geerntet und in PBS resuspendiert. Zellen (1 × 10 6) mit 1 gerechnet gerechnet wurden mgr; M gGlu-HMRG bei 37 ° C für 20 min im Dunkeln inkubiert und Analysiert, um ein Durchflußcytometer (FACSCanto II verwendet; Becton, Dickinson and Company, Franklin Lakes, New Jersey).

Zeitverlauf der Fluoreszenzintensität in kultivierten Zelllinien

Zellen (2 × 10 4) Auf eine gerechnet gerechnet wurden schwarze Platte mit 96 Vertiefungen über Nacht 1 mit Mgr; M gGlu-HMRG mit oder ohne 10 mgr; M GGT Inhibitor (GGsTop®, Wako Pure Chemical Industries) inkubiert. Der zeitliche Verlauf der Fluoreszenzintensität Wurde unter verwendung Eines Mikroplatten-Reader (; Tecan, Männedorf, Schweiz 505-555 nm) Analysiert.

Patientenstudien

Diese Studie acht Aufeinander folgende HNSCC Tumoren prospektiv Durch ESD und Lokale chirurgische Resektion bei sieben Patienten in der Abteilung für Gastroenterologie und Hepatologie und DM Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery von Hokkaido University Hospital zwischen Juni 2014 und Februar 2016 Behandelt prüft.

Die Angabe der ESD oder Lokale chirurgische Resektion für HNSCC Sind Wie folgt; 1) Innerhalb Leichten Invasion im Subepithel und 2) ohne Lymphknotenmetastasen Durch Computertomographie. ESD Würde ein ausgestattet mit Einems Spitze der Einkanal-Magen-Darm-Endoskop mit Einer transparenten Befestigung Haube führte Eine Nadelmesser (KD-10Q-1, Olympus, Tokyo, Japan) 19 und Isolierung Spitze (IT Messer, Olympus) unter Vollnarkose [] . Alle ESD-Verfahren gerechnet gerechnet wurden von Einems erfahrenen Endoskopiker durchgeführt, über 100 Ösophagus-ESD-Verfahren durchgeführt STERBEN hatte.

Lokale chirurgische Resektion Wurde MIT Einems Colorado Mikrodissektion Nadel durchgeführt (Stryker, Kalamazoo, Michigan) und einen elektrochirurgischen Generator (Force FX, Covidien, Dublin, Irland) unter Vollnarkose.

Die resezierten Probe Wurde sofort Auf einem schwarzen Gummi und Stiften Erweitert Fixiert MIT. 100 mgr; M gGlu-HMRG Als nächstes Wurde auf Probe gesprüht sterben. Fluoreszenz-Bildgebung Mit Hilfe Wurde Eines Handheld-Fluoreszenz-Imaging-Systems-durchgeführt (Entdeckung, INDEC Medical Systems, Santa Clara, Kalifornien) STERBEN, erfassung von Weißlicht-Bilder und Fluoreszenzbilder mit 450-490 nm blauen Anregungslicht ermöglicht sterben. Fluoreszenzbilder gerechnet gerechnet wurden aufgezeichnet 0, 0,5, 2, 5, 7, 9, 11 und 13 min nach gGlu-HMRG Verabreichung. Anschließend gerechnet gerechnet wurden sterben Proben Mit PBS gewaschen und Beobachtet ein Endoskop (H260Z, Olympus) unter weissem Licht mit 1,5% Jod-Färbung verwendet Wird.

Die Fluoreszenzintensitäten gerechnet gerechnet wurden mit Bild J-Software (National Institutes of Health, Rockville, Maryland) gemessen. Tumor und Normalen Plattenepithel-Schleimhaut Regionen von Interesse (ROI) gerechnet gerechnet wurden auf jedes Bild manuell Verfolgt. Der ROI des Tumors Würde nach Iodfärbung Bilder Bestimmt den. Die mittlere Fluoreszenzintensität Jeder ROI als Pixelintensitätswerte im Bereich von 0 bis 255 berechnet.

Histopathologie

Proben gerechnet in 40 g / l Formaldehyd-Salzlösung gerechnet wurden, in Paraffin eingebettet Kein Kein und in 5 um abschnitte Fixiert geschnitten. Gewebeschnitte gerechnet gerechnet wurden MIT Hämatoxylin und Eosin (H&E) und mikroskopisch auf histologischen Typ, Größe des Tumors, lymphovascular Invasion und reseziert Marge von erfahrenen Pathologen, laut der Weltgesundheitsorganisation (WHO) Klassifikation untersucht Tiefe der Invasion. Immunhistochemische Analyse von GGT-Expression Wurde ein Anti-GGT1 antikörper unter verwendung von (Verdünnung 1: 600; Abcam, Cambridge, UK).

statistische Analyse

Die Daten gerechnet gerechnet wurden als Mittelwert ± SEM. Die Parameter gerechnet gerechnet wurden Zwischen den Gruppen verglichen mit Einems gekoppelten t -Test. Die unterschiede gerechnet gerechnet wurden bei Einems merkbar angesehen P Wert lt; 0,05. Alle Analysen unter verwendung von GraphPad Prism Version 6 (GraphPad Software, San Diego, Kalifornien) durchgeführt gerechnet gerechnet wurden.

ergebnisse

Evaluierung von gGlu-HMRG in HNSCC Zelllinien

Um GGT-Expression in HNSCC Zellen, gGlu-HMRG-Fluoreszenz Würde unter verwendung von vier Zelllinien von HNSCC untersucht (HSC2, HSC3, HSC4 und SCC25) untersuchen. Alle Tumorzelllinien emittierte Fluoreszenz følgende gGlu-HMRG Verabreichung als Durch Fluoreszenzmikroskopie Nachgewiesen (Abb. 1a) und Durchflusszytometrie (Abb. 1b). Die Fluoreszenzintensität Würde Gesetz über Zeit in allen Zelllinien erhöht die; Wenn jedoch mit Einems GGT Inhibitor kultiviert Wurde Fluoreszenzemission Vollständig blockiert (Abb. 1c). Diese ergebnisse legen nahe, dass GGT Wird in HNSCC Zelllinien exprimiert und dass gGlu-HMRG Durch GGT aktiviert.

Fluoreszenz-Bildgebung von HNSCC Zelllinien in vitro. ein gGlu-HMRG Fluoreszenz Wurde Durch Fluoreszenzmikroskopie Nachgewiesen. Phasenkontrastbilder (linke Spalte), gGlu-HMRG Fluoreszenzbilder (rechte Spalte), Maßstabsbalken, 100 mgr; Meter b Die durchflusszytometrische Analyse von GGT Ausdruck. Offene Fläche; kein gGlu-HMRG, geschlossene Fläche; mit gGlu-HMRG. c GGT Hemmung in Zelllinien zeigt Abnehm GGT-aktivität im laufe der Zeit war zu Einer geringen Fluoreszenzintensität

Die Expression von GGT in den Letzten HNSCC Fälle Behandelt mit ESD

Tumorspezifische Expression von GGT in HNSCC bestätigen, führten wir immunhistologische Untersuchung der Tumoren von drei Letzten Fälle, MIT ESD Behandelt Worden Krieg sterben. Wie in gezeigt. 2. GGT Wurde spezifisch im Tumor exprimiert und in der Basalschicht Kaum des Normalen Gegenstück in allen untersuchten Gefallene ausgedrückt.

Immunhistologische anaylsis der GGT-Expression in den Letzten Gefallene drei HNSCC mit ESD Behandelt. Reseziert Proben mit Hämatoxylin gerechnet gerechnet wurden und Eosin gefärbt (Links ) Und ein Anti-GGT1 antikörper (Recht ). Maßstabsbalken, 500 mgr; Meter Gepunktete und durchgezogene Linien zeigen den Teil der Normalen eithelium und Tumor BZW.

Ex-vivo Fluoreszenz-Bildgebung Mit gGlu-HMRG von HNSCC Gefallene mit ESD oder Lokale chirurgische Resektion Behandelt

Wir untersuchten als nächstes, ob früh HNSCC Kanns Durch Besprühen gGlu-HMRG mit Dissektate Nachgewiesen Werden. ESD und Lokale chirurgische Resektion gerechnet gerechnet wurden bei sieben Patienten mit acht Läsionen durchgeführt. (Tabelle 1). Es war Schwierig, sterben oberflächlichen Tumoren mit weißem Licht (Abb. 3a) zu erfassen und alle Fälle gerechnet gerechnet wurden Kaum schmalbandigen Imaging (NBI, Abb. 3b) Erfasst Werden. Jod-Färbung Wurde Sowohl vor Resektion unter Vollnarkose durchgeführt (Abb. 3c) und nach der Resektion (Abb. 3d). Reseziert Proben gerechnet gerechnet wurden Auch mit gGlu-HMRG besprüht und Fluoreszenzbilder gerechnet gerechnet wurden erhalten (Abb. 3e). In allen Gefallene Würde fluoreszierenden Tumorläsionen in wenigen Minuten zu Einems Bereich Entspricht schnell genau Identisch mit der Jod-ungefärbten Läsion. In mehreren Gefallene gerechnet gerechnet wurden sterben subsites der reseziert Schleimhaut fluoreszierende Auch gGlu-HMRG immunhistologische und zeigte keine positive Färbung für GGT in den Unterseiten der reseziert Schleimhaut vor der anwendung Analyse. DAHER spekulieren wir, dass Autofluoreszenz von der Brenneffekt emittiert Wurde [20]. Sterben Histologische Analyse wettet, sterben Dass Jod-ungefärbten und fluoreszierende Läsion Frühen SCC zum Ausdruck GGT in allen Gefallene Waren (3f -. H).

ESD Endoskopische Submukosadissektion. Alter REICHT 65 von bis 79

Ex-vivo Fluoreszenz-Bildgebung mit gGlu-HMRG von Zwei repräsentativen HNSCC Gefallene (# 1 und # 5 Fälle). ein Endoskopische Bildgebung mit weißem Licht. b Narrow Band Imaging (NBI). c Jod-Färbung unter Vollnarkose durchgeführt. d Resektat Mit Jod-Färbung Beobachtet. e Fluoreszenz-Bildgebung nach gGlu-HMRG Spritzen. f Resektat Mapping für Tumorregion. SCC Würde in rote Linie dargestellt. G Hämatoxylin- und Eosin-Färbung des Tumors und Normalkomponente. h Immunhistochemische Untersuchung untersuchen GGT-Expression im Tumor und Normalkomponente. Platz Linien in f Erstelle den entsprechen Erstelle Oberen Figuren in G und h. Gepunktete Linien in quadratischen f Erstelle den entsprechen Erstelle niedrigeren Zahlen in G und h. Maßstabsbalken von df. 1 mm (Fall # 1) und 5 mm (Fall # 5). Maßstabsbalken von G und h. 200 mgr; m

Die Fluoreszenzintensität des Tumors und Normalen Epithel nach DEM Aufsprühen gGlu-HMRG

Wir maßen schließlich sterben Fluoreszenzintensität Sowohl Tumor und Normalen Epithel aller acht Gefallene für 13 min. Der Tumor Läsion Wurde nach der Iodfärbung Verfolgt (Abb. 4a). Die Fluoreszenzintensität der Läsion Tumor erhöht unmittelbar nach gGlu-HMRG Spritzen und Stieg Auf eine mittlere Intensität von 7 bei 13 min, während der Normalen Schleimhaut Blieb lt; 2 (Fig. 4b). Das Angepasste Rate zwischen Jod-ungefärbten und gGlu-HMRG-induzierte fluoreszierende Fläche Betrug 74%.

Die Fluoreszenzintensität des Tumors im Vergleich zu Normalen Epithel nach gGlu-HMRG Spritzen. ein Ein beispiel für sterben Region of Interest (ROI, Fall # 7) zu verfolgen. Maßstabsbalken, 2 mm. b Zeitverlauf der Fluoreszenzintensität des Tumors und Normalen Epithel nach gGlu-HMRG aller acht Fälle Spritzen

Diskussion

In dieser Studie Haben wir sterben verwendung von gGlu-HMRG zum Nachweis von Frühen HNSCC und festgestellt, dass (1) alle HNSCC Zellinien emittierten Fluoreszenz folgende gGlu-HMRG Exposition untersucht; (2) HNSCC, normales Aber nicht Gewebe, GGT ausgedrückt in drei Jüngsten ESD-Fälle; und (3) Tumorläsionen Würde fluoreszierendes unmittelbar nach gGlu-HMRG auf alle acht HNSCC Gefallene angewendet Werd.

Es Ist Schwierig, oberflächliche HNSCC mit herkömmlichen Endoskopie mit weißem Licht zu Erkennen, Weil Schleimhautveränderungen Sind in der Regel sehr subtil [5. 21]. Vor Kurzem HABEN NBI und AFI verwendet Frühen Krebs des oberen Magen-Darm-Trakt zu Erkennen und berichtet gerechnet gerechnet wurden Weißlicht-Endoskopie in BEZUG auf empfindlichkeit, Spezifität und genauigkeit für STERBEN diagnostizieren von HNSCC und Ösophagus SCC [10 11 überlegen. 21-26]. Allerdings Werden diese Modalitäten gerechnet gerechnet wurden Aus einer begrenzten Anzahl von Instituten und Krankenhäusern und erfordern bemerkenswerte Experten Fähigkeiten berichtet Erfolgreich eingesetzt. Daruber Hinaus Wurde berichtet, sterben Dass Erkennungsrate von Frühen Speiseröhren SCC mit NBI 10-13% für SCC Hochrisikogruppen [24 25] Krieg, Krieg darauf hindeutet, Dass es Eine scharfe Lernkurve für den Nachweis von HNSCC mit NBI erfordert [27]. Daruber Hinaus entzündliche Veränderungen im Larynx gerechnet gerechnet wurden falsch-positive ergebnisse in AFI berichtet verursachen [23]. Daher, mit Denen sterben Entwicklung eines Nicht-Experten Gastroenterologen oder HNO-Arzt frühzeitig HNSCC Erkennen gerechtfertigt ist ein Neuen Verfahrens Auch.

Wenn gGlu-HMRG als Targeting-Mittel GGT auf der Öberfläche von Krebszellen trifft, Wird es Durch GGT hydrolysiert, stark fluoreszierende HMRG Werden sterben. HMRG Wird sofort von Krebszelle Lysosomen Durch Zellmembran [16] aufgenommen sterben. DAHER wird erwartet, dass HMRG starke Fluoreszenz in Krebs-Läsionen zu emittieren. Dementsprechend Wurde gezeigt, sterben Dass topische versprühen von gGlu-HMRG Unmittelbare und Spezifische Erweiterung von Zellen in Tiermodellen [16 17] überexprimieren GGT Bieten Könnte. Daruber Hinaus Wurde vor kurzem Wurde, in Einer Pilotstudie der Fluoreszenzbildgebung von endoskopisch reseziert gezeigt kolorektalen Tumoren, dass sterben topische versprühen von gGlu-HMRG aktiviert schnelle und selektive Fluoreszenz-Bildgebung von 54% und 76% der Adenome und Karzinome in Adenom BZW. [28]. Obwohl Autoren 50 oder 500 verwendet mgr; M gGlu-HMRG, Schlug Unsere ergebnisse dass unter verwendung von 100 sterben mgr; M gGlu-HMRG zur Tumorerkennung ausreichend ist.

Immunhistologische Untersuchung zeigte, dass GGT Wurde stark in Tumorgewebe exprimiert Werd, Aber Kaum auf der Basalmembran des Normalen Epithel exprimiert Werd. Die Fluoreszenzintensität des Normalen Epithel war sehr schwach; Aber es wurde nach und nach mit der Zeit Stärker. Dies ist wahrscheinlich, Weil es Eine Längere Zeit in anspruch Nahm für gGlu-HMRG der Basallamina zu Motivation und andere Mentalität, sterben nur GGT schwach exprimiert, als sterben Tumorzellen zu Motivation und andere Mentalität.

Es gibt Mehrere Einschränkungen dieser Studie. Weil sterben Studie Würde durchgeführt, Ex-vivo. GGT-aktivität Kann zu Einems Gewissen Grad nach Tumorresektion verringert HABEN. Es dauerte 10-20 min Fluoreszenzbildgebung nach Tumorresektion zu initiieren, und Abbildungs ​​Wurde bei Raumtemperatur durchgeführt und nicht bei 37 ° C DAHER wird erwartet, dass gGlu-HMRG in Einems in vivo Klinischen Studie schneller reagieren als in Einer ex-vivo- Studie . Daruber Hinaus, Weil Adler stirbt Eine Pilotstudie untersucht nur acht Gefallene bleibt es geklärt Werden, ob alle oberflächlichen HNSCC und Präkanzerosen Läsion mit gGlu-HMRG detektiert Werden Kann. Zukünftige klinische Studien Eine Größere Anzahl von HNSCC Fälle studieren Würde, diese Bedenken zu klären.

Schlussfolgerungen

Abschließend aktiviert topische versprühen von gGlu-HMRG schnelle und Spezifische Fluoreszenzabbildung von oberflächlichen HNSCC und Erscheint in Früherkennung von HNSCC Nützlich der.

Abkürzungen

AFI, Autofluoreszenz-Bildgebung; DMEM, Dulbecco modifiziertem Eagle-Medium—; DMSO, Dimethylsulfoxid; ESD, Endoskopische Submukosadissektion; FBS, fötales Rinderserum; GGT, y-Glutamyltranspeptidase; gGlu-HMRG, γ-Glutamyl hydroxymethyl Rhodamin grün; HNSCC, Kopf- und Hals Plattenepithelkarzinom; NBI, Narrow Band Imaging; PBS, Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung; ROI, Regionen von Interesse; SCC, Plattenepithelkarzinom

Erklärungen

Danksagungen

Wir sind dankbar für alle Patienten in dieser Studie teilgenommen.

Finanzierung

Diese Studie Würde Unterstützt Durch EINEN Zuschuss-in-Aid finanziert für junge Wissenschaftler (B) aus Japan Gesellschaft zur Förderung der Wissenschaften (JSPS, 26461043) und der von Japanischen Stiftung für Forschung und Förderung der Endoskopie (JFE) Grant.

Verfügbarkeit von Daten und Materialien

VERÖFFENTLICHUNG Unserer Daten nicht Anonymität oder Vertraulichkeit umfassen, und informierte Zustimmung zur Veröffentlichung von Patientendaten erhalten.

Beiträge der Autoren

TM und SOH Experimente durchgeführt und Analysiert und ausgearbeitet die, das Manuskript, YS ausgeführt ESD, AH, sterben Betrieb durchgeführt Werd, YH und KCH ausgeführt pathologischen Untersuchungen, HH, YK und MN in-vitro-Experimente durchgeführt, MKam gGlu-HMRG vorbereitet, mein Sohn Analysen durchgeführt, MKat, NS und YU Überwacht das Gesamte Projekt. Alle Autoren HaBen Gelesen und Haben das Endgültige Manuskript Genehmigt.

Konkurrierende Interessen

Die Autoren erklären, Dass sie keine Interessenkonflikte HABEN.

Ethik genehmigung und Zustimmung zur Teilnahme

Das Ex-vivo Klinischen Studienprotokoll Wurde von der Ethikprüfung Bord von Hokkaido University Hospital Genehmigt. Alle Patienten informierte Zustimmung zur verfügung Gestellt, diese Studie im Rahmen der «Ethik, Zustimmung und Berechtigungen» Überschrift zu beteiligen, und unter der Überschrift «Die Zustimmung zu veröffentlichen» wettet, Dass wir sterben Zustimmung des Teilnehmers zu veröffentlichen, erhalten HABEN.

Offener zugang Dieser Artikel ist unter den bedingungen der Attribution 4.0 Internationale Software-Lizenz Creative Commons (http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/), sterben uneingeschränkte NUTZUNG ERLAUBT, sterben verteilung und Vervielfältigung in Jedem Medium, sofern Sie Über die entsprechenden Kredit GEBEN An den ursprünglichen Autor (en) und der Quelle, eINEN Link zu der Creative-Commons-Lizenz, und zeigen an, ob Änderungen vorgenommen gerechnet gerechnet wurden. Die Creative Commons Public Domain Dedication Verzicht (http://creativecommons.org/publicdomain/zero/1.0/) vergoldet für die Daten in diesem Artikel zur verfügung Gestellt, sofern nicht anders Informationen Informationen angegeben.

Autoren Zugehörigkeiten

Abteilung für Gastroenterologie und Hepatologie, Hokkaido University Graduate School of Medicine

Abteilung für Klinische Pathologie, Hokkaido University Hospital

Labor für Chemische Biologie und Molekulare Bildgebung, Graduate School of Medicine, der University of Tokyo

Abteilung für Endoskopie, Hokkaido University Hospital

Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, Hokkaido University Graduate School of Medicine

Japan Agentur für Medizinische Forschung und Entwicklung (AMED) -CREST

Referenzen

  1. Vigneswaran N, Williams MD. Epidemiologische Trends im Kopf- und Halskrebs und hilft bei der Diagnose. Oral Maxillofac Surg Clin North Am. 2014; 26 (2): 123-41. Artikel anzeigen PubMed PubMed Central Google Scholar
  2. Johansen LV, Grau C, Overgaard J. Hypopharynx Plattenepithelkarzinom — Behandlungsergebnisse in 138 konsekutiv Patienten. Acta Oncol. 2000; 39 (4): 529-36. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  3. Eckel HE, Staar S, Volling P, Sittel C, Damm M, Jungehuelsing M. Chirurgischen Behandlung für Hypopharynx-Karzinom: Machbarkeit, Mortalität und ergebnisse. Otolaryngol Kopf-Hals-Surg. 2001; 124 (5): 561-9. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  4. Argiris A, Karamouzis MV, Raben D, Ferris RL. Kopf- und Halskrebs. Die Lanzette. 2008; 371 (9625): 1695-709. Artikel anzeigen Google Scholar
  5. Muto M, Nakane M, Katada C, Sano Y, Ohtsu A, Esumi H, et al. Plattenepithelkarzinom in situ bei oropharyngealen und hypopharyngeal Schleimhäute. Krebs. 2004; 101 (6): 1375-1381. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  6. Carvalho R, Areia M, Brito D, Saraiva S, Alves S, Cadime AT. Diagnosegenauigkeit von lugol Chromoendoskopie in der Speiseröhre bei Patienten mit Kopf-Hals-Tumoren. Rev Esp Enferm Dig. 2013; 105 (2): 79-83. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  7. Fagundes RB, de Barros SG, Putten AC, Mello ES, Wagner M, Bassi LA, et al. Occult Dysplasie Wird von Lugol Chromoendoskopie bei Alkoholikern mit Einems Hohen Risiko für Plattenepithelkarzinome der Speiseröhre offenbart. Endoskopie. 1999; 31 (4): 281-5. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  8. Hori K, Okada H, Kawahara Y, R Takenaka, Shimizu S, Ohno Y, et al. Lugol-Miktion Läsionen Sind ein Wichtiger Risikofaktor Für einen zweiten primären Plattenepithelkarzinom bei Patienten mit esosphageal Krebs oder Kopf- und Halskrebs. Am J Gastroenterol. 2011; 106 (5): 858-66. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  9. Hanaoka N, Ishihara R, Takeuchi Y, Suzuki M, Uemura H, Fujii T, et al. Klinische ergebnisse der EMR und Endoskopische Submukosadissektion als transorale Behandlung für oberflächliche Rachenkrebs. Kopf Hals. 2013; 35 (9): 1248-1254. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  10. Muto M, Minashi K, Yano T, Saito Y, Oda I, Nonaka S, et al. Die Früherkennung von oberflächlichen Plattenepithelkarzinomen im Kopf- und Halsbereich und der Speiseröhre, Narrow Band Imaging: eine Multizentrische randomisierte kontrollierte Studie. J Clin Oncol. 2010; 28 (9): 1566-1572. Artikel anzeigen PubMed PubMed Central Google Scholar
  11. Suzuki H, Saito Y, Ikehara H, Oda I. beurteilung der Visualisierung von Plattenepithelkarzinomen der Speiseröhre und Rachen ein Autofluoreszenz videoendoscope-Systems. J Gastroenterol Hepatol. 2009; 24 (12): 1834-9. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  12. Pompella A, De Tata V, Paolicchi A, Zunino F. Expression von Gammaglutamyltransferase in Krebszellen und ihre bedeutung in der Arzneimittelresistenz. Biochem Pharmacol. 2006; 71 (3): 231-8. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  13. Schafer C, C Fels, Brucke M, Holzhausen HJ, Bahn H, Wellman M, et al. Gammaglutamyltransferase Ausdruck in höhergradigen astrozytären Gliom. Acta Oncol. 2001; 40 (4): 529-35. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  14. Yao D, Jiang D, Huang Z, Lu J, Tao Q, Yu Z, et al. Abnormale Expression von Hepatom spezifischen Gammaglutamyltransferase und Änderung von Gamma-Glutamyl-Transferase-Gen Methylierungsstatus bei Patienten mit hepatozellulärem Karzinom. Krebs. 2000; 88 (4): 761-9. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  15. Hanigan MH, Frierson Jr HF, Brown JE, Lovell MA, Taylor PT. Menschliche Ovarialtumoren ausdrücken Gamma — Glutamyl. Cancer Res. 1994; 54 (1): 286-90. PubMed Google Scholar
  16. Urano Y, Sakabe M, Kosaka N, Ogawa M, Mitsunaga M, Asanuma D, et al. Schnelle Erkennung von Krebs Durch topisch Eine Gamma-Glutamyl-aktivierte Fluoreszenzsonde sprüht. Sci Transl Med. 2011; 3 (110): 110ra19. Artikel anzeigen Google Scholar
  17. Mitsunaga M, Kosaka N, Choyke PL, Junge MR, Dextras CR, Saud SM et al. Fluoreszenzendoskopische Nachweis von Maus-ulcerosa-assoziierten Darmkrebs Durch topisch applizierte enzymatisch schnell aktivierbare sonde. Darm. 2013; 62 (8): 1179-1186. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  18. Kamiya M, Asanuma D, Kuranaga E, Takeishi A, Sakabe M, Miura M, et al. beta-Galactosidase Fluoreszenzsonde mit verbesserten zellulären Akkumulation auf der Basis Eines spirocyclized Rhodol Gerüst. J Am Chem Soc. 2011; 133 (33): 12,960-3. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  19. Shimizu Y, Yamamoto J, Kato M, Yoshida T, J Hirota, Ono Y, et al. Endoskopische Submukosadissektion zur Behandlung von Frühen Stadium Hypopharynxkarzinoms. Gastrointest Endosc. 2006; 64 (2): 255-9. Diskussion 60-2. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  20. Devgan L, Bhat S, Aylward S, Spence RJ. Die Modalitäten für beurteilung der Brandwunde Tiefe sterben. J Verbrennungen Wunden. 2006; 5: e2. PubMed PubMed Central Google Scholar
  21. Watanabe A, Taniguchi M, Tsujie H, Hosokawa M, Fujita M, Sasaki S. Der Wert von Narrow Band Imaging für Früherkennung von sberkfpoklheK sterben. Eur Arch Otorhinolaryngol. 2009; 266 (7): 1017-1023. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  22. Goda K, Dobashi A, Tajiri H. Perspektiven auf Schmalband-Bildgebung Endoskopie für oberflächliche Plattenepithelkarzinome Neubildungen der orohypopharynx und Speiseröhre. Dig Endosc. 2014; 26 Suppl 1: 1-11. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  23. Dobre M, Poenaru M, Balica NC, Doros CI. Nachweis von Frühen sberkfpoklheK und seine Vorläuferläsionen von Einems Echtzeit-Autofluoreszenzabbildungssystem. Rom J Morphol Embryol. 2014; 55 (4): 1377-1381. PubMed Google Scholar
  24. Nonaka S, Saito Y, Oda I, Kozu T, Saito D. Schmalband-Bildgebung Endoskopie mit Vergrößerung ist für Nützlich sterben metachrone oberflächliche Rachenkrebs bei Patienten mit Plattenepithelkarzinomen des Ösophagus zu Erkennen. J Gastroenterol Hepatol. 2010; 25 (2): 264-9. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  25. Katada C, Tanabe S, Koizumi W, Higuchi K, Sasaki T, Azuma M, et al. Narrow Band Imaging für oberflächliche Plattenepithelkarzinom des Kopfes und Halses bei Patienten MIT Plattenepithelkarzinomen des Ösophagus zu Erkennen. Endoskopie. 2010; 42 (3): 185-90. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  26. Arens C, Reussner D, Woenkhaus J, Leunig A, Betz CS, Glanz H. Indirekte Fluoreszenz Laryngoskopie bei der Diagnose von präkanzerösen und kanzerösen Läsionen laryngeal. Eur Arch Otorhinolaryngol. 2007; 264 (6): 621-6. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  27. Ishihara R, Takeuchi Y, R Chatani, Kidu T, Inoue T, Hanaoka N, et al. Prospective Evaluation von schmalbandigen Bildgebung Endoskopie für das Screening von Ösophagus-Schleimhaut hochgradigen Neoplasien in Erfahrene und Weniger Erfahrene Endoskopiker. Dis Esophagus. 2010; 23 (6): 480-6. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar
  28. Sato C, Abe S, Saito Y, So Tsuruki E, Takamaru H, Makazu M, et al. Eine Pilotstudie der Fluoreszenz-Bildgebung von kolorektalen Tumoren Eine Gamma-Glutamyl-Transpeptidase-aktivierbare fluoreszierende Sonde. Verdauung. 2015; 91 (1): 70-6. Artikel anzeigen PubMed Google Scholar

Copyright

© Der Autor (en). 2016

ZUSAMMENHÄNGENDE POSTS

  • Episodische Juckreiz in Einems Fall von Wirbelsäulen …

    Episodische Juckreiz in Einems Fall, der spinalen Gliom abstrakt Hintergrund Itch ist ein Häufige Beschwerde von Patienten berichtet, und ist in der Regel zu dermatologischen oder metabolischen …

  • Citrus aurantium L, Zitrus aurantium Öl.

    Citrus aurantium L. Ätherisches Öl zeigt anxiolytische-Ähnliche aktivität vermittelt Durch 5-HT 1A -Rezeptoren und senkt den Cholesterinspiegel nach wiederholter oraler treatment Abstrakt …

  • Diagnostizieren und treatment des hereditären …

    Diagnostizieren und treatment des hereditären Angioödems mit C1-Inhibitor Normalen Abstrakt Bis vor Kurzem Wurde Angenommen that hereditären Angioödem is a disease, sterben Ausschließlich aus …

  • Glutenfreie vegane Ernährung induziert …

    Glutenfreie vegane Ernährung induziert verringerte LDL und oxidiertes LDL-Spiegel und Kochfeld atheroprotective Natürliche antikörper gegen Phosphorylcholin bei Patienten mit rheumatoider Arthritis: …

  • Endoskopische Gallen Stenting …

    Endoskopische Gallen Stenting für akute Cholezystitis: eine retrospektive Studie of46 ältere Patienten, sterben 65 Jahre oder älter Hintergrund Endoskopische transpapillären pernasaler …

  • EINEN Algorithmus Entwickeln zu identifizieren …

    EINEN Algorithmus Entwickeln Menschen mit chronisch obstruktiver Lungenerkrankung (COPD) Mit Verwaltungsdaten zu identifizieren Hintergrund Eine Wichtige Voraussetzung für das Chronic Care Modell …